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細胞表面染色實驗操作流程是什么?

 發布時間:2023-10-20 點擊量:45

你知道細胞表面染色實驗操作流程是什么嗎?讓我們一起來看看吧!

一、細胞計數

將培養好的細胞收集于15mL離心管并計數;500g離心4min,去上清。

二、制備單細胞懸液

將收集的細胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重懸,400g離心3min,去上清,重復2次;用0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞至濃度1x106個細胞/mL,分配到96孔板中,每孔100μl細胞懸液。

三、阻斷Fc受體

室溫孵育10-20min。

四、一抗孵育

每孔加入稀釋后的一抗溶液100μl,2-8℃反應30min。

五、洗滌

400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍。

六、二抗孵育

對于非熒光染料直標抗體,加入100μl熒光二抗重懸,避光2-8℃反應30min。對于直標抗體直接跳到步驟八。

七、洗滌

400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍。

八、重懸細胞

200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞,4℃保存,上機分析。

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